Տեղեկություն

Հեպատոցելուլյար քաղցկեղ շների մեջ

Հեպատոցելուլյար քաղցկեղ շների մեջ


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Հեպատոցելուլյար քաղցկեղ շների մեջ առաջանում է որպես առաջնային նորագոյացություն դեպքերի մոտավորապես 30%-ում[@b1]: Բազմաթիվ ուսումնասիրություններ արձանագրել են բժշկական բուժման տարբեր ձևերի արդյունավետությունը, ինչպիսիք են քիմիոթերապիան, ռադիոթերապիան և վիրաբուժական ռեզեկցիան HCC-ով հիվանդների մոտ[@b2][@b3]: Շների մոտ HCC-ի կանխատեսումը սովորաբար վատ է[@b4], և HCC-ի մետաստազիայի առավել հաճախ հանդիպող վայրերն են թոքերը, որովայնը և դիֆրագմը: Լյարդի HCC-ով հիվանդների գոյատևումը, որը մետաստազներ է տալիս որովայնի խոռոչում, մոտավորապես մեկ ամիս է[@b5]: Այսպիսով, ընթացիկ ուսումնասիրությունը ուսումնասիրել է, թե արդյոք որովայնային մետաստազների (ՊՄ) թերապևտիկ ռազմավարությունը կարող է բարելավել HCC-ով շների գոյատևումը:

Հեպատոկարցինոման չարորակ ուռուցք է, որը առաջանում է հեպատոցիտներից[@b1]: Վերջերս մարդու HCC բջջային գծերը, ներառյալ Hep3B, HepG2, Huh-7 և Hep4070, ստեղծվել են Hep3B բջիջներից[@b6]: Շների HCC-ները (որոնք մարդկային HCC-ն ուսումնասիրելու համար ամենատարածված կենդանական մոդելն են) հիմնականում ստացվում են լյարդի քաղցկեղի բջիջներից (Hep3B)[@b7]: Բջջային կուլտուրայի համար շատ կարևոր է օգտագործել պտղի եղջերավոր անասունի շիճուկի (FBS) ճիշտ կոնցենտրացիան միջավայրում, և շատ կամ շատ քիչ FBS կարող է հանգեցնել բջիջների մահվան[@b8]: FBS-ի իդեալական կոնցենտրացիան 5%-ից 10% է[@b8]: Այս ուսումնասիրության ընթացքում մենք կատարեցինք in-vitro փորձեր Hep3B բջիջներում՝ որոշելու FBS-ի համապատասխան կոնցենտրացիան միջավայրում: Այս փորձերի արդյունքների հիման վրա HCC բջիջների համար օգտագործվել է առանց շիճուկի միջավայր (SFM)՝ նվազեցնելու աղտոտման հնարավորությունները և նաև խուսափելու իմունային մերժումից կենդանիների փորձերում: Մեր փորձերի արդյունքները ցույց տվեցին, որ HCC բջիջները կարող են լավ գոյատևել SFM-ում, և այդ բջիջները կարող են օգտագործվել ապագա in-vivo փորձերի համար:

Վերջերս HCC-ը համարվում էր շների մահացության միլիոն պատճառ[@b9]: Այնուամենայնիվ, HCC-ի համար համապատասխան կենդանական մոդելի բացակայության պատճառով շների HCC-ի պաթոգենեզը վատ է հասկացված: Մի քանի փորձարարական մեթոդներ են մշակվել շների մեջ HCC-ի առաջացման համար[@b4][@b9][@b10]: Մեր ուսումնասիրության մեջ մենք օգտագործեցինք շների մեջ HCC-ի առաջացման երկու մեթոդ, ներառյալ DMBA-ով հարուցված հեպատոկարցինոգենեզը և CCl~4~-ի պատճառած հեպատոկարցինոգենեզը: Այս երկու մեթոդներից էլ HCC-ի պաթոլոգիական հատվածները ցույց են տվել նմանատիպ արդյունքներ: Ինչպես հաղորդվում է, DMBA-ով հարուցված հեպատոկարցինոգենեզի ուռուցքները ձևավորվել են 6 ամիս բուժումից հետո[@b4]: Մեր ուսումնասիրության ընթացքում ուռուցքները ձևավորվել են 6 ամսից հետո: Այնուամենայնիվ, CCl~4~-ի պատճառած հեպատոկարցինոգենեզի ուռուցքները ձևավորվել են 12 ամիս բուժումից հետո: Այս արդյունքը համահունչ էր Bies et al.[@b10] արդյունքներին: Նմուշի մեծ չափերի և երկար դիտարկման ժամանակի շնորհիվ մեր մոդելը հարմար է HCC-ի երկարաժամկետ արդյունքը դիտարկելու համար:

Գոյություն ունի HCC-ի երեք ենթատեսակ՝ մանր բջջային քաղցկեղ, խոշոր բջջային քաղցկեղ և խառը բջիջների քաղցկեղ[@b2]: Պաթոլոգիական ախտորոշումն ապահովելու համար օգտագործվել է HCC-ի հիստոպաթոլոգիական դասակարգումը: Այնուամենայնիվ, կան որոշ կլինիկական պայմաններ և փորձարարական մեթոդներ, որոնք կարող են խանգարել HCC[@b11] պաթոլոգիական դասակարգմանը: Այսպիսով, իմունոհիստոքիմիան օգտագործվել է HCC-ի դասակարգման հետագա ստուգման համար: Մենք օգտագործեցինք HCC մարկերներ AFP, CK, GPC3 և CgA՝ հայտնաբերելու շների HCC-ի տարբեր ենթատեսակները: Մեր ուսումնասիրության ընթացքում մենք պարզեցինք, որ HCC ենթատիպերը տարբեր արդյունքներ ունեն: CgA-ն ցույց է տվել խոշոր բջջային և խառը բջիջների քաղցկեղի հայտնաբերման առավել զգայուն արդյունքները: GPC3-ը հայտնաբերվել է փոքր բջջային և խառը բջիջների քաղցկեղի մեջ: Այնուամենայնիվ, AFP-ն և CK-ն դրական չեն եղել HCC-ի ենթատեսակներից որևէ մեկում: Չնայած HCC-ն հիմնականում բաժանված էր փոքր բջջային քաղցկեղի, խոշոր բջջային քաղցկեղի և խառը բջջային քաղցկեղի, դրա դասակարգումը մեր ուսումնասիրության մեջ դեռ նախնական էր: Գոյություն ունեին HCC-ի որոշ ենթատեսակներ (օրինակ՝ փոքր բջջային կարցինոմա), որոնք հնարավոր չէր հայտնաբերել: Դա կարող է պայմանավորված լինել այն պատճառով, որ շների մեջ HCC-ի ենթատեսակները տարբերվում էին մարդկանցից:

Ամփոփելով, լյարդի ուռուցքի մոդելը, որը մենք օգտագործեցինք մեր ուսումնասիրության մեջ, շատ վերարտադրելի էր և կարող էր օգտագործվել հետազոտական ​​տարբեր ասպեկտներում: Մենք ցույց տվեցինք, որ HCC մոդելը, որը մենք հաստատել ենք այս ուսումնասիրության մեջ, համապատասխանում է մարդու HCC-ին: Այսպիսով, մեր ուսումնասիրության արդյունքները կարող են օգտագործվել HCC-ի դեմ միացությունների սքրինինգում:

Նյութեր եւ մեթոդներ

=====================

Կենդանիներ

-------

Ընդհանուր առմամբ 24 շներ են օգտագործվել այս հետազոտության մեջ, որոնք ներառում են 11 անձեռնմխելի արու Բիգլ և 13 անձեռնմխելի էգ Բիգլ: Շների տարիքը եղել է 8 ամսականից 4 տարեկան։ Շներին գտել են Չինաստանի Գիտությունների ակադեմիայի Կենդանիների և բույսերի խնամքի հետազոտական ​​ինստիտուտի փորձարարական կենդանիների կենտրոնից (Պեկին, Չինաստան): Նրանց տեղավորել են կենդանիների փորձարարական կենտրոնում գտնվող տնակում և կերակրել սնունդով և ջրով: Կենդանիները մաքրվել են Կենդանիների և բույսերի խնամքի գիտահետազոտական ​​ինստիտուտի ինստիտուցիոնալ ուղեցույցներին համապատասխան: Արձանագրությունը հաստատվել է Կենդանիների և բույսերի խնամքի գիտահետազոտական ​​ինստիտուտի Կենդանիների խնամքի և օգտագործման հանձնաժողովի կողմից:

Բջջային կուլտուրա

------------

Շների լյարդի երեք բջջային գիծ (DH82, Hep3B և HLF) և երկու մարդու լյարդի բջջային գիծ (HepG2 և HuH-7) տրամադրվել են Չինաստանի Գիտությունների ակադեմիայի բջջային ռեսուրս կենտրոնի կողմից (Շանգ, Չինաստան): Բջիջները մշակվել են Dulbecco-ի մոդիֆիկացված Eagle միջավայրում (DMEM), որը պարունակում է 5% (v/v) պտղի խոշոր եղջերավոր անասունի շիճուկ (FBS), 100 U/ml պենիցիլին և 100 μg/ml streptomycin: Բջիջները ինկուբացվել են խոնավացված ինկուբատորում, որը պարունակում է 95% O~2~/5% CO~2~ 37°C ջերմաստիճանում:

Լյարդի քաղցկեղի բջիջների մեկուսացում ուռուցքային հյուսվածքից

-------------------------------------------------

Ընդհանուր առմամբ երեք շներ են օգտագործվել ուռուցքային հյուսվածքից քաղցկեղի բջիջների մեկուսացման համար։ Հյուսվածքները մարսվել են կոլագենազ IV-ով (0,5 մգ/մլ) 30 րոպե 37°C-ում և տարանջատվել 75 մկմ առանց պողպատի մաղի միջով՝ միայնակ բջիջներ պատրաստելու համար: Բջիջները մշակվել են DMEM-ում 5% (v/v) FBS, 100 U/ml պենիցիլին և 100 μg/ml streptomycin 37°C ջերմաստիճանում 95% O~2~/5% CO~2~ պարունակող խոնավացված ինկուբատորի տակ: . Բջիջները հավաքվեցին, նորից սերմացվեցին նոր կուլտուրայի կերակուրների մեջ և աճեցվեցին մինչև միախառնման հասնելը: Բջիջները մնացվեցին DMEM-ում, որը պարունակում է 5% (v/v) FBS, 100 U/ml պենիցիլին և 100 μg/ml streptomycin:

Լյարդի քաղցկեղի բջիջների գծի նույնականացում

-------------------------------------

Բջջային գծերը վավերացվել են՝ օգտագործելով կարճ տանդեմ կրկնվող տեղամասերի մուլտիպլեքսային PCR ուժեղացում, ինչպես նկարագրված է DSMZ-ի Բջջային վավերացման ծառայության կողմից (Միկրոօրգանիզմների և բջջային մշակույթների գերմանական հավաքածու, Բրաունշվեյգ, Գերմանիա), ինչպես նաև դրանց գենոմի լայնածավալ SNP-ի վերլուծությունը: պրոֆիլը՝ օգտագործելով Բջջային գծի զննման ծառայությունը (CLS, Roche Applied Science, Mannheim, Գերմանիա):

ՄՏՍ-ի վերլուծություն

---------

Բջիջների տարածումը որոշվել է 3-[4,5-դիմեթիլթիազոլ-2-իլ]-5-[3-կարբոքսիմեթոքսիֆենով


Դիտեք տեսանյութը: Բուժ ԻնֆոBuj Info 157-Լյարդի նորագոյացություններ (Հունիսի 2022).

Video, Sitemap-Video, Sitemap-Videos